Bacterias aisladas de líquenes en el Parque Nacional Natural Chingaza

Study Extent

Parque Nacional Natural Chingaza. Se hizo muestreo puntual en marzo 2018.

Sampling

Las muestras se recolectaron con pinzas estériles y se depositaron en bolsas plásticas ziploc. Los líquenes adheridos a roca fueron recuperados con una espátula estéril y depositados en un tubo Eppendorf de 1.5mL estéril. Las muestras se transportaron a temperatura ambiente hasta el laboratorio de CorpoGen y fueron procesadas dentro de las siguientes 48 horas.

Method steps

1. Se lavó cada liquen brevemente con agua destilada estéril. En tubos Falcon de 50mL se cubrió la muestra con agua destilada hasta cubrir y se fragmentó el liquen con perlas de vidrio de 4mm usando un vortex. Se sembraron 100mL de diluciones seriadas en los medios de cultivo: Actinomycete Isolation Agar (AIA), International Streptomyces Project medium-2 (ISP2), complementados con Nistatina (150mg/L) y ácido nalidíxico (50mg/L); Gause Agar (G) y Gause Oligotrófico (GO) (Wang et al., 2014), complementados con Dicromato de potasio (80mg/L). Las muestras se incubaron a temperatura ambiente hasta obtener colonias visibles, se purificaron en el mismo medio y se preservaron a -80ºC con 30% v/v de glicerol.
2. Se extrajo el ADN de los aislamientos usando fenol cloroformo, con algunas modificaciones (Wilson, 2001) que se usó para amplificar el gen 16S rRNA con los iniciadores 27F 5’ -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’ y 1492R 5’-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’ (Lane, 1991; Hayashi et al.,2002). Las secuencias obtenidas se analizaron frente a la base de datos del NCBI para identificación taxonómica.
3. Se analizó la actividad antimicrobiana usando doble capa de agar (Hockett & Baltrus, 2017), contra siete patógenos: cinco bacterias Gram-negativas Salmonella enterica, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Staphylococcus aureus y la levadura Candida albicans. Los cultivos se incubaron a 37ºC durante 24 horas. Las bacterias que presentaron un halo de inhibición se consideraron como productoras de compuestos antimicrobianos.

Este recurso comprende 22 bacterias, todas aisladas hasta nivel de género. Hay un total de 12 géneros siendo el más abundante Streptomyces con 9 registros.

1. Corynebacteriales
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2. Corynebacteriales
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3. Micrococcales
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4. Pseudomonadales
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5. Pseudonocardiales
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6. Rhizobiales
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7. Streptomycetales
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8. Streptosporangiales
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9. Xanthomonadales
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Se recolectaron líquenes de diferentes tipos de sustratos, cortícolas (madera), saxícolas (rocas) y terrícolas (tierra) en diferentes áreas dentro del Parque Nacional Natural Chingaza.