Hongos y nematodos asociados a sustratos para la propagación vegetativa de accesiones de mora del Banco de Germoplasma Vegetal de Colombia

Study Extent

Se obtuvieron Microorganismos (hongos y nematodos) asociados a los sustratos (compost y suelo) de propagación de Rubus spp. del Banco de Germoplasma Vegetal en el C.I La Selva, Colombia., el cual se localiza en las coordenadas geográficas Longitud: 075°24'51.9" y Latitud: 06°07'52.7" en la zona de vida Bosque húmedo montano bajo. Esta ensayo fue adicional a la subactividad llamada “Generación de un procedimiento operativo estándar, POE” para la colección de mora del proyecto BGA Conservación en campo BG Vegetal con el objetivo de identificar la biodiversidad de hongos y nematodos existentes.

Sampling

En junio de 2022, el equipo de investigadores Ortíz- Paz, R. A.; Helen- Mira R. H.; López- Hernández, L.; Velásquez- Arroyo, Macías- Vivares, A. y Alonso- Mesa, M. colectaron dos tipos de sustratos (compost y suelo) para la propagación vegetativa de la mora (Rubus spp.) en la Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria, Agrosavia, C.I La Selva siguiendo el protocolo de muestreo de sustratos de Yeves et al. (1991). Así mismo, se realizó un muestreo destructivo de las plantas. en donde se tomaron muestras de suelo alrededor de la rizosfera y se colectaron muestras de raíces de mora para identificación de nematodos siguiendo el protocolo de Suárez et al. (2003).

Quality Control

Los ensayos se realizaron con personal autorizado por Agrosavia tanto para identificación de hongos como para nematodos, un Fitopatólogo, dos profesionales Ingenieros Agrónomos de apoyo y dos asistentes técnicos, uno en el área de Fitopatología y otro en el área de nematología; además se contó con un profesional de apoyo bioestadístico. El equipo posee conocimientos técnicos, entrenamiento y experiencia en las funciones asignadas. Las áreas de trabajo, fitopatología y entomología del C.I La Selva en Agrosavia, cuentan con Cabinas de bioseguridad, micropipetas, incubadoras, refrigeradores y/congeladores y; equipos necesarios para la realización del ensayo; estos tienen mantenimiento actualizado continuo tanto correctivo como preventivo. Se cuenta con condiciones controladas de equipos para que no se afecte la calidad de los datos. Se cuenta con formato de registro de datos originales en los procesos a partir de la emisión del resultado; así mismo, se tienen observaciones originales y fotografías, con el objetivo de verificar la trazabilidad de los procesos a que fue sometida la muestra.

Method steps

1. Hongos: Los sustratos descritos en el protocolo de muestreo, una vez tamizados se llevaron a la cámara de seguridad tipo A2 del laboratorio de Microbiología Agrícola, de Agrosavia- C.I. La Selva; en donde se realizaron diluciones seriadas de tres concentraciones en agua destilada estéril para depositar alícuotas de estás en medio Agar Papa Dextrosa (PDA) contenido en cajas de Petri selladas con papel vinípel y rotuladas con las numeraciones de las diluciones correspondientes y el sustrato de procedencia. Las cajas se dejaron a temperatura de 27,2°C en una incubadora en un diseño completamente aleatorizado hasta completar el mayor crecimiento de los hongos (en general 90 mm de diámetro) para evaluar variables macroscópicas y microscópicas.
2. Las variables de caracterización macroscópica se evaluaron cada 48 horas, estas fueron: presencia o ausencia de crecimiento; tipo de crecimiento; color y código de color; forma; borde; textura; elevación teniendo en cuenta la metodología de Castaño zapata et al. (1994) y Botero et al. (2013).
3. La identificación microscópica de los hongos se realizó al finalizar el ensayo, con base en las claves taxonómicas de Barnett (1962), Sutton (1980) y Hanlin (1990). Adicionalmente, se realizaron cultivos monospóricos de los hongos según el protocolo descrito por Saldarriaga, Bernal y Macías (2009), de las cuales, dos muestras de cada hongo se enviaron al laboratorio de Genética molecular de Agrosavia, C.I Tibaitatá, para realizar el protocolo de extracción y secuenciación de ADN y obtener los electroferogramas en formato "ab1".
4. Nematodos: Para la extracción de nematodos se realizó siguiendo el protocolo de Cobb modificado de Suárez et al (2003) preparando una suspensión de las muestras de suelo o de raíces pasándolas por una serie de tamices de decantación para colectar los nematodos.
5. La cuantificación de nematodos se realizó en cajas de lecturas para nematodos. Los nematodos se guardan temporalmente en frascos transparentes con capacidad de 120 ml, que ponen a refrigerar (Suárez et al. 2003). La identificación de los nematodos se realizó teniendo en cuenta las claves taxonómicas de Thorne (1961), Agrios (2005) y Perry, Moens (2006).

Se identificó un género de nematodo (Helicotylenchus), cuatro especies de hongos (Paraconiothyrium fuckelii y Chaetomium cochliodes, Fusarium oxysporum y Penicillium janthinellum); además dos géneros de hongos (Talaromyces y Pestalotiopsis).

1. Helicotylenchus
   rank: genus
2. Paraconiothyrium fuckelii
   rank: species
3. Chaetomium cochliodes
   rank: species
4. Talaromyces
   rank: genus
5. Pestalotiopsis
   rank: genus
6. Fusarium oxysporum
   rank: species
7. Penicillium janthinellum
   rank: species

La Investigación se realizó en las colecciones de mora del Banco de Germoplasma Vegetal, en La Corporación Colombiana de Investigación Agropecuria- Agrosavia. Instalaciones del C.I. La Selva.