Abejas corbiculadas (Apidae) en el marco del proyecto Comparación morfológica de los Cuerpos Fungiformes en abejas

Study Extent

Se realizaron colectas en tres puntos, uno en el municipio de Choachí en Cundinamarca, en el municipio de Paipa en Boyacá y en el municipio de San Martín en Meta.

Sampling

Se realizaron colectas de especimenes representates de las cuatro tirbus de interés, estos fueron capturados a medida que se encontraron al estar en campo utilizando dos métodos. Debido a que serán utilizados para analisis histologicos neuroanatomicos, su sacrificio se desarrollará en formol al 7% en donde serán a su vez conservados hasta el momento de su proceso para fijación y tinción para poder evaluar correctamente las relaciones neurofilogenéticas entre las diferentes poblaciones representativas los coribulados del neotrópico colombiano.

Method steps

1. Colecta de Individuos Para la captura de los individuos se utilizarán dos métodos, el primero es busqueda activa: realizada con el uso de red entomológica, colectando así las abejas de interés encontradas dentro de las zonas delimitadas para el desarrollo del proyecto
2. Trabajo de campo: Se colectaron entre 4 y 10 representantes de cada tribu todas pertenecientes a una misma especie que fue luego confirmada mediante el libro Introducción a los Hymenoptera de la Región Neotropical (Sharkey, M. J, 2006). Los especímenes en estudio fueron todas hembras forrajeras con el fin de generar un control de casta puesto que se sabe que dentro de una misma especie existen diferentes mecanismos del desarrollo del sistema nervoso debido a las diferentes demandas cognitivas que influyen entonces en los patrones de inversión energética en la formación del tejido cerebral (S O'Donnell, 2011). Todos los individuos fueron recolectados mediante búsqueda activa utilizando una red entomológica y cebo. El cebo se utilizó para la captura de E. smaragdina debido al rápido vuelo y comportamientos solitarios de este grupo (Cameron, 2004) y consistió en pescado crudo en descomposición, olor que atraen a las hembras de esta tribu (Montoya-Lerma1,2013). Después de la colecta. Los ejemplares fueron sacrificados en formol buffer al 10% y decapitados el mismo día de su sacrificio almacenando cada cabeza por separado en frascos de vidrio con en formol buffer al 10%. Las cabezas se mantuvieron en nevera a 4ºC para asegurar la calidad del tejido cerebral hasta el inicio del protocolo histológico.
3. Análisis morfológico por métodos de histología clásica: Se realizó la tinción clásica de histologías para la visualización y análisis de los cortes: -Tinción de hematoxilina-eosina: Método de histoquímica no excluyente que permite la visualización de las características de la matriz citoplásmica, nuclear y extracelular (Fischer, 2008). Esta fue empleada dado que permite la diferenciación de todos los compartimientos del cuerpo fungiforme, su forma, volumen y estructura neuronal en general, además de lograr diferenciar subpoblaciones de neuronas mediante su tamaño. El protocolo empleado se muestra a continuación y fue modificado del trabajo de la Dra. Aleidy Galindo durante el 2012 en su periodo como profesora de histología de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Obtención del material: Cabezas disectadas de los individuos pertenecientes a las cuatro especies mencionadas anteriormente Fijación. Formol bufferizado al 10% Deshidratación: Empleando tres diferentes concentraciones de alcohol a temperatura ambiente y en forma ascendente: Concentración Duración (min) 70% 30 80% 30 96% 30 96% 30 Pre- parafinación: Realizada generando pases a diferentes mezclas de Xitol y Parafina a diferentes proporciones como se indica a continuación: Recipiente Parafina Xilol Duración (min) 1 25 75 30 2 50 50 30 3 75 25 30 4 100 0 30 Nota: El último recipiente de parafina pura debe ser calentado hasta los 60 ºC y mantener esta temperatura durante el pase con el fin de embeber la cabeza en el estado líquido del material Inclusión en Parafina. Las cabezas fueron ubicadas en el molde de manera transversal y divididas por tribu. Una vez organizadas se dejaron enfriar a temperatura ambiente por una hora aproximadamente y luego fueron llevadas al congelador “overnight” para asegurar la calidad del corte. Cortes. Se realizaron los cortes en el Laboratorio de Neurociencias de la Universidad Distrital Francisco José de Calda utilizando el micrótomo manual de referencia Leica RM2125 RTS, a 7 μm generando tiras con aproximadamente 7 cortes cada una hasta obtener la estructura deseada. Extendido de los cortes: Las tiras de cortes fueron pasadas a una piscina de agua caliente a 45 ºC con aproximadamente 5 gramos derretidos de gelatina sin sabor. Desde aquí fueron pescadas con una lámina sobre la cual el tejido quedó extendido. Se dejaron secar a temperatura ambiente aproximadamente una hora y luego pasadas a una plancha caliente a 60 ºC para la fijación final durante otra hora. Desparafinación, tinción y obtención de láminas: Proceso Tiempo,Desparafinación,Xilol 1-3 min,Xilol 2-3 min,Xilol 3-3 min,Hidratación, Isopropanol 1-15 pases,Isopropanol 2-15 pases,Isopropanol 3-15 pases,Lavado con agua destilada 6-pases,Tren de Tinción Hematoxilina-Eosina,Hematoxilina de Harris-1.5 min,Lavado con agua destilada-10 pases (Hasta quitar exceso),Eosina 50 seg, Deshidratación,Lavado con agua destilada-6 pases,Isopropanol 1-6 pases,Isopropanol 2-6 pases,Isopropanol 3-6 pases,Xilol 1-6 pases,Xilol 2-6 pases,Xilol 3-6 pases
4. Análisis de datos: Los análisis morfológicos se llevaron a cabo por medio de registro fotográfico realizado con el fotomicroscopio ZeissDM 750 del Laboratorio de Neurociencias de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas. Las relaciones consideradas en cuanto a tamaño y forma fueron los siguientes: 1) Relación entre volumen de cáliz vs volumen de subcompartimientos 2) Presencia de cálices dobles robustos Se estudió por igual la configuración, presencia y organización de las diferentes clases de Células Kenyon previamente mencionadas: pKC, mKC y lKC

Los 17 registros pertenecen a la familia Apidae, abarcando dos especies y una tribu. Un 52% esta clasificado a nivel es Especie y un 48% a nivel de Tribu.

1. Bombus rubicundus
   rank: species
2. Apis mellifera
   rank: species
3. Euglossini
   rank: tribe

El material de trabajo fue colectado en la región de del Altiplano Cundiboyasese y en el Orinoco. Visitandose el Parque Ecológico Matarredonda vía Choachí, la Reserva Natural el Caduceo (San Martin-Meta) en Boyacá-Paipa una Finca de familia en lotes vacíos llamada La Zulia.