PELD - MG | Biodiversidade e Biogeografia de Comunidades Bacterianas do parque Estadual do Rio Doce (MG)

Study Extent

De 2007 a 2011 foram realizadas coletasde amostras de água na Lagoa Carioca, situada no Parques Estadual do Rio Doce (MG), as coletas foram feitas na coluna d’água na região limnética, litorânea, e em uma região intermediária, em três profundidades, levando-se em consideração a penetração da luz de 100% (superfície), 10% (1m-1,5m) e 1% (3m-4,5m).

Sampling

As amostras de água foram coletadas em triplicata, em frascos esterelizados. Alíquotas de 100µL de água foram semeadas em agar PTYG (0.5% peptona,0.5% triptona, 0.5% extrato de levedura, 1.0% glicose, 0.06% MgSO4.7 H2O, 0.006% CaCl2,1.5% agar). Estas placas foram incubadas a 28ºC por até sete dias. As colônias que apresentavam características morfológicas distintas uma das outras foram selecionadas para estudos posteriores. Para isto, cada colônia foi inoculada em caldo nutriente e incubada a 28ºC por 24h.

Method steps

1. A fim de comparar a diversidade bacteriana e a estrutura de comunidades nas amostras de água, foi utilizado ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis). Assim, o gene de rRNA 16S foi amplificado completamente com os iniciadores PA (Kuske et al., 1997) e U2 (Lu et al., 2000). Endonucleases AflIII e AluI foramusadas a fim de promover um perfil de restrição. Todos os perfis que se apresentaramdiferentes foram seqüenciados a fim de se conhecer a diversidade existente.O fingerprinting genômico foi realizado usando o iniciador (GTG) 5(5’-GTGGTGGTGGTGGTG- 3’) e rep-PCR com iniciador BOX-A1R (5’-CATACGGCAAGGCGACGCT-3’). A mistura para a reação da PCR continha 60 ng de DNA molde, tampão para PCR, 0,3 µM do iniciador, 0,2 mM de dNTP’s e 1 U de Taq polimerase,resultando em um volume total de 20 µL.

Os exemplares estão identificados no menor nível taxonômico possível, nesse caso a nível de gênero.

1. Monera
   rank: kingdom
2. Proteobacteria
   rank: phylum
3. Firmicutes
   rank: phylum
4. Actinobacteria
   rank: phylum
5. Bacteroides
   rank: genus

Trecho Médio da Bacia do Rio Doce – MG (Brasil)