Registro de Ocotea puberula en la Sierra Nevada de Santa Marta

Study Extent

Se colectaron muestras de hojas de la especie Ocotea puberula en el corregimiento de San Pedro de la Sierra, municipio de Cienaga (Magdalena), estribaciones de la Sierra Nevada de Santa Marta (SNSM).

Sampling

Las muestras vegetales fueron colectadas con métodos manuales, tomando 100-300 gr de material vegetal (hojas) de cada individuo que fueron almacenados y transportados para su posterior análisis. Se empleó métodos no invasivos que no alteró el desarrollo y por ende la permanencia y conservación de los individuos de las especies. Las muestras vegetales recolectadas se depositaron en el Herbario de la Universidad de Magdalena (UTMC).

Method steps

1. Obtención de los extractos etanólicos crudos: El material vegetal fue separado y secado a temperatura ambiente, bajo sombra durante 10 días. Una vez secas las hojas de Ocotea se molieron en un molino de cuchillas en el laboratorio de productos pesqueros en la planta piloto de la Universidad del Magdalena (Taganga). El método de extracción para la obtención de los extractos etanólicos fue por percolación con etanol al 96%, las muestras fueron colocadas en los percoladores (de acero inoxidable) y luego se les añadió el solvente hasta cubrir por completo la muestra. En el transcurso de dos semanas se recogieron los extractos crudos en erlenmeyers debidamente rotulados, el solvente fue reemplazado cada periodo de tiempo transcurrido. Posteriormente y una vez obtenida la totalidad de las soluciones, se procedió a remover el solvente por el método de presión reducida empleando un rotaevaporador LABOROTA© 4000 (Heidolph). Por último, los extractos crudos fueron depositados en cápsulas de porcelana y llevados a una cabina extractora para terminar de evaporar el solvente restante, siendo estos almacenados en frascos de vidrio listos para su análisis y rotulados como EHOP.
2. Caracterización por cromatografía líquida de alta resolución de los extractos etanólicos de hojas de O. puberula: Para preparar la muestra de inyección se reconstituyó 1 mg EHOP en 1 mL de MeOH, posteriormente fue filtrado (filtro de 0.22 μm) antes de ser analizado por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Los solventes utilizados para el análisis son los comúnmente empleados como el acetonitrilo (CH3CN) y el ácido acético (CH3COOH), en el caso del agua (H2O) fue sometida a doble desionización en un sistema Milli-Q con una conductividad de 18.2 MΩ. Los reactivos fueron filtrados previamente en una membrana de 5 μm y posteriormente desgasificados en baño de ultrasonido. Para el análisis cromatográfico de las muestras vegetales se utilizó un cromatógrafo UHPLC, modelo Ultimate 3000SD (Dionex - Thermo Scientific), equipado con automuestreador, bomba binaria y detector de arreglo de diodos (DAD). Se empleó una columna Hypersil Gold, de 150 x 4.6 mm, con 5 μm de tamaño de partícula, a un flujo de 1 mL/min. Las fases móviles fueron un buffer 0.5% de agua (H2O) y ácido acético (CH3COOH) (A) y MeOH (CH3OH) (B), el tiempo de corrida fueron 38 minutos, el volumen de inyección de la muestra fue de 10 μL, la temperatura de la muestra y de la columna estuvo constantemente en 30ºC y el sistema de elusión en gradiente fue efectuado de acuerdo a las siguientes condiciones: 0 - 5 minutos 10 % B, 5 – 15 minutos 30 % B, 15 – 17 minutos 60 % B, 17 – 19 minutos 90 % B, 19 – 24 minutos 90 % B, 24 – 25 minutos 100 % B, 25 – 27 minutos 100 % B, 27- 29 minutos 70 % B, 29 – 31 minutos 70 % B, 31 – 35 minutos 30 % B, 35 – 36 minutos 10 % B, 36 – 38 minutos 10 % B. Posteriormente se re-equilibró la columna por 2.5 minutos de acuerdo a las condiciones ideales (10% B).
3. Obtención de aceites esenciales de O. puberula: La extracción del AEs de hojas de Ocotea puberula se desarrolló mediante el método de destilación por arrastre con vapor (Lizcano y Vergara, 2008). Este tiene como principio recoger todos los productos volátiles por medio del calentamiento de un solvente, en nuestro caso agua destilada. El vapor de agua arrastra los metabolitos hasta el refrigerante, el cual ayuda a condensar la muestra. Posteriormente, esta se recoge en el colector, dejando reposar por cierto tiempo y al cabo de unos minutos, el resultado final es una sustancia viscosa o aceite que es posteriormente separado por diferencia de densidad. Los aceites esenciales obtenidos se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y fueron almacenados entre 0-5 °C, para su posterior análisis.
4. Caracterización de los aceites esenciales de hojas de O. puberula por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas: El aceite esencial se analizó mediante GC capilar y GC / MS. El análisis GC se llevó a cabo en un cromatógrafo de gases Shimad-zu GC-17A equipado con un FID y operado en modo split (1:15, volumen inyectado 1 μL), utilizando una columna capilar de sílice fundida HP-5, 30 mx 0,25 mm, Espesor de revestimiento de 0,5 μm. Las condiciones operativas utilizadas fueron las siguientes: programa de temperatura de 50 ° C (4 min) a 300 ° C (20 min) a 4 ° C / min, inyector split / splitless (300 ° C), el gas portador era helio a 1,0 ml / min y el gas auxiliar era nitrógeno a 30 ml / min. La cuantificación se realizó utilizando el software Class 5000. Los porcentajes relativos se calcularon mediante la integración electrónica de FID, cuyas áreas de picos se utilizaron sin corrección del factor de respuesta. Los índices de retención (RI) se calcularon para ayudar en la determinación mediante el uso de hidrocarburos lineales (C8-C24).

Este recurso contiene un registro de la especie Ocotea puberula.

1. Ocotea puberula
   common name: Laurel amarillo rank: species

Se colectaron muestras de hojas de la especie Ocotea puberula entre los meses de agosto y septiembre de 2017, en el corregimiento de San Pedro de la Sierra, municipio de Cienaga (Magdalena), estribaciones de la Sierra Nevada de Santa Marta.